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Sistema de mutagénesis rápida y sistema de mutagénesis multisitio rápido
El sistema de mutagénesis dirigida al sitio es un simple y altamente Método eficiente para mutagénesis dirigida por el sitio in vitro. Todo el procedimiento, incluida la transformación, puede completarse en menos de 3 horas (cuando se usa un 3 kb de plásmido). Este sistema único puede generar sustituciones básicas, deleciones o inserciones de hasta 12 nucleótidos en plásmidos de ADN de hasta 14 kb de cualquier Fuente, sin vectores especializados ni sitios de restricción requeridos. La alta eficiencia (> 90% de eficiencia de mutagénesis, dependiendo del tamaño del El plásmido utilizado) y los protocolos simplificados de este kit permiten la generación de mutantes dirigidos al sitio. Dos cebadores de oligonucleótidos mutagénicos complementarios con sitios de mutación ubicados en el centro se requieren para generar un sitio de mutación, y los pasos de metilación y amplificación del ADN se combinan en un solo reacción. No se requiere un paso de digestión in vitro después de la reacción de mutagénesis y no se requiere ningún paso de purificación después de la metilación o la mutagénesis.
Aplicaciones
Se puede usar mutagénesis dirigida por el sitio in vitro para:
• Estudiar la función de proteínas
• Identificar sitios enzimáticos activos
• Diseñar nuevas proteínas
Los kits son casi los mismos, pero el kit multisitio contiene un 2x mejorado Mezcla enzimática con protocolos optimizados para mutagénesis de sitios múltiples (hasta 3 sitios). También se introdujo una herramienta web para el diseño de la imprimación, pero esto también se puede usar para el kit original.
Sistema de mutagénesis rápida y sistema de mutagénesis multisitio rápido
El sistema de mutagénesis dirigida al sitio es un simple y altamente Método eficiente para mutagénesis dirigida por el sitio in vitro. Todo el procedimiento, incluida la transformación, puede completarse en menos de 3 horas (cuando se usa un 3 kb de plásmido). Este sistema único puede generar sustituciones básicas, deleciones o inserciones de hasta 12 nucleótidos en plásmidos de ADN de hasta 14 kb de cualquier Fuente, sin vectores especializados ni sitios de restricción requeridos. La alta eficiencia (> 90% de eficiencia de mutagénesis, dependiendo del tamaño del El plásmido utilizado) y los protocolos simplificados de este kit permiten la generación de mutantes dirigidos al sitio. Dos cebadores de oligonucleótidos mutagénicos complementarios con sitios de mutación ubicados en el centro se requieren para generar un sitio de mutación, y los pasos de metilación y amplificación del ADN se combinan en un solo reacción. No se requiere un paso de digestión in vitro después de la reacción de mutagénesis y no se requiere ningún paso de purificación después de la metilación o la mutagénesis.
Aplicaciones
Se puede usar mutagénesis dirigida por el sitio in vitro para:
• Estudiar la función de proteínas
• Identificar sitios enzimáticos activos
• Diseñar nuevas proteínas
Los kits son casi los mismos, pero el kit multisitio contiene un 2x mejorado Mezcla enzimática con protocolos optimizados para mutagénesis de sitios múltiples (hasta 3 sitios). También se introdujo una herramienta web para el diseño de la imprimación, pero esto también se puede usar para el kit original.
